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“磁珠提取,质优品全” ——核酸提取磁珠选择及相关问题全解
来源: | 作者:pmo6172be | 发布时间: 2025-01-23 | 165 次浏览 | 分享到:

在核酸检测过程中,磁珠法核酸提取因检测灵敏度高、操作可自动化、高通量、安全和快速等特性,被广泛应用。但在核酸提取过程中,需要注意的细节较多,一处出错都会导致结果的失败,下文帮大家整理出了一些常见问题并进行解答,希望对你会有帮助。


1、有哪些方法可以进行核酸提取,有什么分别?

核酸(Nucleic Acid)是一类非常重要的生物大分子,它在生物的多种生命活动中扮演着重要的角色。进行核酸研究的**个前提就是能够将核酸从众多复杂的生物分子中提取出来,并纯化到一定程度,以便进行相应的科学研究和实际应用。下图是小编给大家带来的不同的提取DNA的方法介绍。

图2 不同核酸提取纯化方法对比


2、那种磁珠表面修饰更适合核酸提取?

一般磁珠由三层构成,*里面是聚苯乙烯,外面包裹一层磁性物质四氧化三铁,*外面再包一层高分子材料,上面偶联不同的官能团。不同功能的磁珠,偶联的官能团不同,纯化核酸用的一般是羟基(-OH)。

图3 不同功能基团吸附核酸原理示意图


3、核酸提取产率低是什么原因?

核酸提取的每一个过程都有可能影响核酸的回收效率,一般过程包括有样本裂解、核酸结合、磁珠清洗、产物洗脱及保存等步骤(下图)。

图4 核酸提取产物得率低原因及解决方案


4、样品裂解效果不好,能否通过增加裂解液使用量,改善裂解效果并提升提取效果?

增加裂解液导致液体体积增多,磁珠与目的物的碰撞几率减小,导致吸附量下降,不能保证核酸提取效率的,所以单纯增加试剂使用量改善提取效果并不一定完全有效。


5、核酸提取纯度不高,可能会有哪些原因?该怎么解决?

图5 核酸提取纯度不高的原因及解决方案


6、磁珠使用过程中,怎样避免核酸降解?

样本切记不可反复冻融,提取的样本要注意在合适的温度保存,长期保存尽量 -80 ℃;

每个步骤都要注意充分的混合均匀,避免团块的残留影响实验结果;

在洗脱时,时间过长或者温度过高,核酸有可能会降解;

 

7、提取效果不如某种试剂盒,就是磁珠不好吗?

很多实验者在磁珠筛选过程中都是在已经成熟试剂体系下直接替换磁珠用于比较提取效果,这样就很容易得出某种磁珠效果不好的结论。但实际上,由于不同磁珠适合的体系和用量是不同的,往往需要调整过后才能获得更好的提取效果。